LifeSensorsKits and Plates

⊙

PROTACs ® Assay Plate

표적단백질분해 플랫폼(Proteolysis-targeting chimera, PROTAC)은 치료할 수 없는 단백질을 타켓으로 하는 새로운 치료법으로 급부상하고 있습니다. PROTACs은 목표 단백질(target protein)과 ubiquitin (Ub)이 결합된 E3 ligase에 동시에 결합하는 작은 분자입니다. 이 세 분자가 결합함으로 인해 목표 단백질이 유비퀴틴화되고 결국 분해됩니다. LifeSensors는 high-throughput plate 기반으로 목표 단백질을 직접 PROTAC 매개 유비퀴틴화 시키고 분해시키는 과정을 모니터링 할 수 있는 방법을 개발하였습니다. 이 방법은 빠르고 효과적이며 정량적으로 세포주 및 내재 단백질과 작동합니다.

안정적인 세포주 생산이나 목표 단백질에 표지해야 하는 등 인공물 생성이 필요 없습니다.

⊙

in vitro E1-E2-E3 Assays

• Ubiquitin activating enzyme, E1
• Ubiquitin conjugating enzyme, E2
• Ubiquitin ligase, E3

유비퀴틴은 3 종류의 단백질 E1, E2, E3의 순차적인 작용에 의해 기질에 결합합니다. 유비퀴틴의 C-말단에 있는 글리신이 기질 단백질의 리신의 R기에 있는 NH3 분자에 결합함으로써 기질과 공유결합을 형성합니다. 일반적으로 유비튀틴이 결합된 단백질은 proteasome에서 분해가 됩니다. 이 때, proteasome에 의해 분해되기 위해서는 유비퀴틴이 여러 개가 붙은 폴리유비퀴틴이 기질에 결합되어야 합니다.

LifeSensors사는 결합 상호작용 연구를 위한 DUB-resistant polyubiquitin chain, DUB assay나 스크리닝(fluorophores and reporter enzymes)를 위한 ubiquitin conjugates, DUB 특이성이나 binding assay를 위해 여러 형태의 유비퀴틴 사슬 (di, tri, tetra-ubiquitin chains), E3 ligase 실험이나 DUB 선택적인 분석 실험을 위한 site-specific lysine ubiquitin mutants 등의 다양한 유비퀴틴 유도체(ubiquitin derivatives)를 개발하고 있습니다

.

⊙

UbiTest

™

UbiTest 키트는 표적 단백질이 폴리유비퀴틴화 되었는지 여부를 확인하는데 사용됩니다. 단백질 유비퀴틴화를 확인하는 가장 일반적인 방법인 면역침전 및 웨스턴 블롯 분석을 개선한 탁월한 플롯폼 중 하나입니다. 그러나 기질에 대한 항체는 종종 면역 블롯팅 단계에서 기질의 폴리 유비퀴틴화된 형태와 다르게 상호 작용합니다. 이것은 epitope 가림이나 감소된 친화성, 선택성의 변화 때문입니다. 단백질 유비퀴틴화를 검증하는 보다 확실한 방법은 면역 블롯 분석 이전에 광범위한 형태의 deubiquitinase (DUB)에 의한 분해와 면역침전법을 결합시키는 것입니다. DUB 처리후 관심 단백질 (POI; protein of interest)에 대한 신호증가는, 처리하지 않은 샘플에서 명확한 반응성이 없더라도 단백질이 유비퀴틴화 되었음을 표시하는 것입니다. POI의 면역 반성성 변화로 인한 잠재적인 문제를 방지하기 위해 UbiTest 분석은 TUBE를 사용하여 폴리유비퀴틴화된 단백질만을 골라 낼 수 있습니다. TUBE (tandem ubiquitin binding entities)는 나노몰 범위의 tetra-ubiquitin에 대한 해리 상수를 갖는 tandem ubiqutin 결합 도메인입니다. TUIBE1은 8개 연결 유형의 모든 것과 결합하는 것으로 입증 되었습니다.

⊙

UbiQuant

™

UbiQuant는 세포 용해물에서 샌드위치 방법으로 유비퀴틴 정도를 측정합니다. 플레이트 기반 분석은 독점적인 유비퀴틴 결합 시약을 사용하여 모든 유비퀴틴을 캡쳐합니다. 효소가 결합된 항-유비퀴틴 단일클론 항체 (VU-2)가 생성하는 신호를 플레이트 판독기에서 측정합니다. 유비퀴틴 표준 곡선을 사용하면 유비퀴틴 농도를 직접 측정할 수 있습니다.

⊙

High-Throughput Plates

LifeSensors사는 타겟 단백질의 PROTC 매개 유비퀴틴화 및 분해를 직접 모니터링 할 수 있는 high-throughput 기반의 방법을 개발했습니다. 이 방법은 내재 단백질이나 세포주를 사용하여, 빠르고, 효율적으로 정량화 할 수 있습니다. 안정적인 세포주 생성이나 타겟 단백질 태그과 같은 인위적인 작업이 필요 없습니다.

제품 특장점

▶ Cell lysates에서 관심 단백질의 유비퀴틴화 수준에서 PROTAC 화합물의 high-throughput 스크리닝이 가능하며

▶ Cell lysates에 PROTAC 처리 후, plate 기반으로 관심 단백질의 유비퀴틴화 및 분해 정도 분석

▶ 정량적이지 않은 웨스턴 블롯과 달리 PROTAC 활동의 정량적 측정 가능

▶ 하루 만에 수행할 수 있는 효율적이고 신속한 분석법

▶ 내재 단백질을 활용함으로 세포주를 생성해야 하거나 관심 단백질에 태그를 붙여야 하는 과정이 필요 없습니다.

Cat.No.

Description

High-Throughput Plates

PA950

PROTAC ® Assay Plate

[Components]

• Coated plates: One pre-coated and blocked 96-well strip plate
• Blocking concentrate (BC): 12 mL of 5X blocking agent for antibody dilution
• Plastic plate seals: Two plate seals
• Detection reagent 1 (DR1): 1.0 mL vial of DR1 reagent
• Detection reagent 2 (DR2): 1.0 mL vial of DR2 reagent
• MG132: 25 µL vial
• PR-619: 25 µL vial
• 1,10-phenanthroline: 100 µL vial

UE901

UbiQuant™ Plate

UE903

UbiQuant™ S Plate

UE905

UbiQuant™ Ultra Plate

in vitro E1-E2-E3 Assays

UC101

E3LITE Customizable Ubiquitin Ligase Kit

고객의 요구에 맞게 구성 가능 (Plate size, Ubiquitin E2 Conjugating Enzyme, Recombinant Ubiquitin 등을 실험목적에 맞게 선택 가능)

[Components]

• Ubiquitin E1 Activating Enzyme
• Choice of Ubiquitin E2 Conjugating Enzyme(s)
• E1-E2-E3 Control
• Choice of Recombinant Ubiquitin
• Detection Reagent 1
• Linear Polyubiquitin Control
• (2) modular 96- or 384-well pre-coated plates

UC104

E2 SELECT Profiling & Selection Kit

[Components]

• 1× pre-coated 96-well plate containing a mix of E1, E2, and Ubiquitin. 24 E2s are provided in triplicate
• E1-E2-E3 Control
• Linear Polyubiquitin Detection Control
• Detection Reagent 1

UC105

E1 LITE – UBE1 Activity Assay Kit

UC106

E1/E2 LITE – Ubiquitin Transfer Assay Kit

UbiQuant

UE101

UbiQuant™ Kit

UE103

UbiQuant™ S Kit

UbiTest

UM411

UbiTest Agarose-TUBE Elution Kit

UM411M

UbiTest Magnetic TUBE Elution Kit

UM412

Linkage Profiling UbiTest – Agarose TUBE Elution Kit

UM412M

Linkage-Specific UbiTest – Magnetic TUBE Elution Kit

UM413

K63 Linkage Specific UbiTest – Agarose TUBE Elution Kit

UM413M

K63 Linkage Specific UbiTest – Magnetic TUBE Elution Kit

UM414

K48 Linkage Specific UbiTest – Agarose TUBE Elution Kit

UM414M

K48 Linkage-Specific UbiTest – Magnetic TUBE Elution Kit